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原位PCR

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
原位PCR就是在組織細胞里進行PCR反應(yīng),它結(jié)合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術(shù)的優(yōu)點,是細胞學(xué)科研與臨床診斷領(lǐng)域里的一項有較大潛力的新技術(shù).
  原位PCR是Hasse等于1990年建立的,實驗用的標(biāo)本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等.其基本方法為①固定組織或細胞:將組織細胞固定于預(yù)先用四氟乙烯包被的玻片上,并用多聚甲醛處理,再滅活除去細胞內(nèi)源性過氧化物酶.②蛋白酶K消化處理:用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后,96℃2min以滅活蛋白酶K.③PCR擴增:在組織細胞片上,加PCR反應(yīng)液,覆蓋并加液體石蠟后,直接放在擴增儀的金屬板上,進行PCR循環(huán)擴增.有的基因擴增儀帶有專門用于原位PCR的裝置.④雜交:PCR擴增結(jié)束后,用標(biāo)記的寡核苷酸探針進行原位雜交.⑤顯微鏡觀察結(jié)果.
  原位PCR既能分辯鑒定帶有靶序列的細胞,又能標(biāo)出靶序列在細胞內(nèi)的位置,于分子和細胞水平上研究疾病的發(fā)病機理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)歸有重大的實用價值.其特異性和敏感性高于一般的PCR.
 

 

 
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