微生物檢測易錯 10 題：別讓 “常識” 變成你的 “盲區(qū)”

微生物檢測是食品、醫(yī)藥、環(huán)境等領(lǐng)域質(zhì)量控制的 “守門人”，從業(yè)者每天與培養(yǎng)皿、移液器、生化反應(yīng)管為伴，但那些習(xí)以為常的操作里，往往藏著容易被忽略的 “細(xì)節(jié)陷阱”。以下 10 道常識題，覆蓋基礎(chǔ)操作、標(biāo)準(zhǔn)解讀、結(jié)果判定、儀器維護(hù)及應(yīng)急處理等核心環(huán)節(jié) —— 不少從業(yè) 3 年的技術(shù)人員都曾在這些 “看似簡單” 的題目上栽跟頭�？靵硖魬�(zhàn)一下，看看你能答對幾道？

一、基礎(chǔ)操作題

1. 單選題：配制固體培養(yǎng)基時，瓊脂的加入量通常為（ ），且滅菌后應(yīng)在（ ）內(nèi)倒平板，以下選項(xiàng)正確的是？

A. 1%-1.5%；45-50℃

B. 2%-3%；50-55℃

C. 1%-1.5%；55-60℃

D. 2%-3%；45-50℃

2. 判斷題：為提高效率，移液時可將移液器吸頭伸入試劑瓶底部反復(fù)吹吸混勻液體。（ ）

二、標(biāo)準(zhǔn)理解題：

3. 單選題：根據(jù) GB 4789.2-2022《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定》，培養(yǎng)菌落總數(shù)時，傾注用的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在（ ），培養(yǎng)條件為（ ）？

A. 46℃±1℃；36℃±1℃培養(yǎng) 48h±2h

B. 45-50℃；37℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h

C. 46℃±1℃；37℃±1℃培養(yǎng) 48h±2h

D. 50℃以下；36℃±1℃培養(yǎng) 24h±2h

4. 多選題：下列關(guān)于 “無菌操作” 的描述中，符合實(shí)驗(yàn)室規(guī)范的有（ ）？

A. 無菌操作前 30min 開啟超凈工作臺紫外燈消毒

B. 佩戴無菌手套后，可直接接觸超凈工作臺內(nèi)壁

C. 接種環(huán)滅菌后，需冷卻至室溫再接觸菌種

D. 無菌培養(yǎng)皿打開后，皿蓋可倒扣在實(shí)驗(yàn)臺面上

三、結(jié)果判斷題：

5. 單選題：在進(jìn)行大腸菌群 MPN 計(jì)數(shù)時，某樣品 3 個稀釋度（1:10、1:100、1:1000）的發(fā)酵管陽性結(jié)果為：1:10（3/3）、1:100（2/3）、1:1000（0/3），查 MPN 檢索表對應(yīng)的數(shù)值為（ ）？

A. 23 MPN/g(mL)

B. 30 MPN/g(mL)

C. 230 MPN/g(mL)

D. 300 MPN/g(mL)

6. 判斷題：在霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)時，培養(yǎng)皿中出現(xiàn)的黑色、圓形、表面光滑的菌落，可直接判定為霉菌菌落。（ ）

四、儀器使用題：

7. 單選題：使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌時，若滅菌物品為 “裝有 500mL 培養(yǎng)基的三角瓶”，正確的滅菌參數(shù)為（ ）？

A. 121℃、103.4kPa、15min

B. 121℃、103.4kPa、30min

C. 115℃、68.9kPa、15min

D. 115℃、68.9kPa、30min

8. 判斷題：移液器每次使用前都需進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)前應(yīng)將移液器和校準(zhǔn)用砝碼在室溫下平衡 30min 以上。（ ）

五、應(yīng)急處理題：

9. 單選題：實(shí)驗(yàn)過程中，若不慎將含菌培養(yǎng)物灑落在超凈工作臺外的實(shí)驗(yàn)臺面上，正確的處理步驟是（ ）？

A. 直接用抹布擦拭干凈，再用 75% 酒精消毒臺面

B. 先用含有效氯 1000mg/L 的消毒液覆蓋浸泡 10min，再擦拭干凈，最后用 75% 酒精消毒

C. 立即用酒精燈灼燒污染區(qū)域，再用濕布擦拭

D. 先將污染區(qū)域隔離，待實(shí)驗(yàn)結(jié)束后再處理

10. 多選題：下列關(guān)于 “培養(yǎng)基滅菌后不凝固” 的原因分析中，合理的有（ ）？

A. 瓊脂添加量不足

B. 滅菌時間過長導(dǎo)致瓊脂分解

C. 滅菌后冷卻速度過快

D. 培養(yǎng)基 pH 值過低或過高

答案與解析匯總

一、基礎(chǔ)操作題

1. 答案：A

解析：本題易錯選 C 或 D，核心是混淆 “固體 / 半固體瓊脂用量” 和 “倒平板溫度范圍”。瓊脂作為凝固劑，常規(guī)固體培養(yǎng)基添加量為 1%-1.5%，2%-3% 為半固體培養(yǎng)基（如動力試驗(yàn)培養(yǎng)基）的標(biāo)準(zhǔn)用量，因此可直接排除 B、D；滅菌后的培養(yǎng)基需冷卻至 45-50℃倒平板 —— 溫度過高會燙死后續(xù)接種的目標(biāo)菌，過低則會提前凝固導(dǎo)致平板厚薄不均，故 A 正確。

2. 答案：錯誤

解析：這是實(shí)驗(yàn)室高頻違規(guī)操作，風(fēng)險點(diǎn)有二：一是吸頭伸入瓶底時，外壁沾染的微生物、灰塵會直接污染整瓶試劑；二是反復(fù)吹吸易產(chǎn)生氣溶膠，還可能導(dǎo)致移液器內(nèi)部污染試劑。正確操作：吸頭僅伸入液面下 1-2cm，緩慢吸液后在瓶壁輕靠去除多余液體，嚴(yán)禁吹吸混勻試劑瓶內(nèi)原液。

二、標(biāo)準(zhǔn)理解題

3. 答案：A

解析：本題為 “標(biāo)準(zhǔn)細(xì)節(jié)辨析題”，易錯選 C，關(guān)鍵是區(qū)分 “國標(biāo)明確參數(shù)” 與 “其他領(lǐng)域常規(guī)條件”。新版國標(biāo)強(qiáng)制規(guī)定：菌落總數(shù)測定時，傾注用培養(yǎng)基溫度需嚴(yán)格控制在 46℃±1℃（建議用恒溫水浴維持），培養(yǎng)條件為 36℃±1℃、48h±2h。需特別注意：化妝品、藥品等領(lǐng)域的菌落總數(shù)培養(yǎng)常采用 37℃條件，但食品檢測必須嚴(yán)格遵循 GB 4789.2-2022 要求，不可混淆。

4. 答案：ACD

解析：B 選項(xiàng)錯誤，超凈工作臺內(nèi)壁為 “潔凈區(qū)” 而非 “無菌區(qū)”，接觸后會污染手套；A 選項(xiàng)正確，紫外燈消毒需提前 30min 開啟，消毒后關(guān)閉并通風(fēng) 10-15min 再操作，避免臭氧殘留影響實(shí)驗(yàn)；C 選項(xiàng)正確，接種環(huán)滅菌后直接接觸菌種會導(dǎo)致微生物被燙死，可通過接觸空白培養(yǎng)基邊緣判斷冷卻情況；D 選項(xiàng)正確，皿蓋倒扣能防止臺面污染物落入培養(yǎng)皿，是無菌操作的基礎(chǔ)要求。

三、結(jié)果判斷題

5. 答案：A

解析：本題易錯選 C，核心是掌握 “MPN 檢索表使用邏輯”。當(dāng)陽性結(jié)果為 “3-2-0” 時，首先對應(yīng)稀釋倍數(shù)為 “10⁻¹、10⁻²、10⁻³”，檢索表中該組合的基礎(chǔ) MPN 值為 23，再乘以 “最高稀釋倍數(shù)的倒數(shù)”（即 10¹），最終結(jié)果為 23×1=23 MPN/g (mL)。很多人誤將基礎(chǔ)值 23 直接乘以 100（10²），導(dǎo)致結(jié)果擴(kuò)大 10 倍，本質(zhì)是忽略了 “稀釋度與檢索值的對應(yīng)關(guān)系”。

6. 答案：錯誤

解析：僅憑肉眼形態(tài)判斷易犯 “經(jīng)驗(yàn)主義錯誤”。霉菌菌落典型特征為絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，雖顏色可能為黑色，但黑色、圓形光滑的菌落也可能是枯草芽孢桿菌老齡菌落或異常酵母菌落。正確判定方法：需結(jié)合顯微鏡觀察 —— 霉菌有明顯的菌絲和孢子結(jié)構(gòu)，而細(xì)菌、酵母菌無菌絲，這是區(qū)分三者的關(guān)鍵依據(jù)。

四、儀器使用題

7. 答案：B

解析：本題易錯選 A，核心是 “根據(jù)物品體積調(diào)整滅菌時間”。121℃、103.4kPa 是常規(guī)濕熱滅菌的溫度和壓力，但滅菌時間需根據(jù)液體體積調(diào)整：50mL 以下小體積液體或固體物品可采用 15min，而500mL 等大體積液體需延長至 30min，確保容器中心溫度達(dá)到 121℃，避免 “表面滅菌、內(nèi)部未滅菌” 的隱患。C、D 選項(xiàng)的 115℃參數(shù)多用于含糖類、易分解成分的培養(yǎng)基，本題不適用。

8. 答案：錯誤

解析：本題易錯點(diǎn)在 “校準(zhǔn)頻率”。移液器無需 “每次使用前” 校準(zhǔn)，常規(guī)校準(zhǔn)周期為 3-6 個月，僅在出現(xiàn)吸液滴漏、液面異常、摔碰等情況時需臨時校準(zhǔn)；但校準(zhǔn)前的 “溫度平衡” 步驟正確 —— 需將移液器、砝碼、蒸餾水在室溫下放置 30min 以上，避免溫度差異導(dǎo)致稱量誤差，影響校準(zhǔn)精度。過度頻繁校準(zhǔn)不僅不必要，還可能因操作不當(dāng)損傷移液器內(nèi)部組件。

五、應(yīng)急處理題

9. 答案：B

解析：A 選項(xiàng)直接擦拭會導(dǎo)致微生物擴(kuò)散；C 選項(xiàng)灼燒僅適用于接種環(huán)等金屬物品，無法消毒臺面且可能損壞實(shí)驗(yàn)臺；D 選項(xiàng)延遲處理會增加交叉污染風(fēng)險。標(biāo)準(zhǔn)處理流程：第一步用高濃度消毒液（1000mg/L 含氯消毒液）覆蓋污染區(qū)域，浸泡 10min 徹底殺滅微生物；第二步擦拭清除殘留物；第三步用 75% 酒精二次消毒，去除消毒液殘留，避免腐蝕臺面。

10. 答案：ABD

解析：C 選項(xiàng)錯誤，冷卻速度過快僅會導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固不均勻（出現(xiàn)塊狀、氣泡），但不會導(dǎo)致完全不凝固；A 選項(xiàng)，瓊脂添加量低于 1% 時，無法形成穩(wěn)定凝膠結(jié)構(gòu)，必然不凝固；B 選項(xiàng)，長時間高溫會使瓊脂多糖鏈斷裂，失去凝固能力，這是 “過度滅菌” 的常見后果；D 選項(xiàng)，pH 值＜5.0 或＞8.0 會破壞瓊脂的膠體結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致凝固失敗。實(shí)際操作中，需結(jié)合稱量記錄、滅菌參數(shù)和 pH 檢測結(jié)果綜合排查。

得分說明與總結(jié)

8-10 分：恭喜！你對微生物檢測的細(xì)節(jié)把控精準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)理解透徹，是實(shí)驗(yàn)室的 “可靠骨干”，繼續(xù)保持嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮髁?xí)慣即可。

5-7 分：基礎(chǔ)能力達(dá)標(biāo)，但在標(biāo)準(zhǔn)細(xì)節(jié)、應(yīng)急處理等環(huán)節(jié)仍有疏漏。建議重點(diǎn)研讀對應(yīng)領(lǐng)域國標(biāo)（如食品 GB 4789 系列、醫(yī)藥 GMP 附錄），多參與實(shí)操演練，強(qiáng)化 “按標(biāo)準(zhǔn)操作” 的意識。

0-4 分：需高度警惕！你的操作可能存在質(zhì)量風(fēng)險甚至安全隱患。建議重新系統(tǒng)學(xué)習(xí)《微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB 19489）和《實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范》，從基礎(chǔ)操作開始反復(fù)練習(xí)，必要時尋求資深技術(shù)人員指導(dǎo)。